【摘 要】
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[目的]旨在快速优化双特异性抗体细胞培养工艺参数,提高蛋白表达量,改善产品关键质量属性.[方法]应用确定性筛选实验设计研究工艺参数(接种密度、培养温度和流加策略)对细胞生长、蛋白表达及关键质量属性(电荷异质性、聚体和高甘露糖型)的影响,利用一步法找出最佳工艺条件,然后放大至2L生物反应器进行工艺验证.[结果]应用JMP软件对实验数据拟合分析找出了最佳工艺条件,接种密度:(1.3±0.2)×106 cells/mL,培养温度:36.5±0.5℃,补料策略:第3d、13 d流加初始培养体积3％,第5d、7d、
【机 构】
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杭州尚健生物技术有限公司,浙江杭州310052
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[目的]旨在快速优化双特异性抗体细胞培养工艺参数,提高蛋白表达量,改善产品关键质量属性.[方法]应用确定性筛选实验设计研究工艺参数(接种密度、培养温度和流加策略)对细胞生长、蛋白表达及关键质量属性(电荷异质性、聚体和高甘露糖型)的影响,利用一步法找出最佳工艺条件,然后放大至2L生物反应器进行工艺验证.[结果]应用JMP软件对实验数据拟合分析找出了最佳工艺条件,接种密度:(1.3±0.2)×106 cells/mL,培养温度:36.5±0.5℃,补料策略:第3d、13 d流加初始培养体积3％,第5d、7d、9d、11d流加初始培养体积3.5％.通过2L生物反应器进行了工艺验证.活细胞密度峰值提高了11％,蛋白表达量提高了15％,质量合格.[结论]通过确定性筛选实验设计一步法快速找出了表达双特异性抗体的最佳细胞培养工艺条件,并且能在生物反应器中得到重复和验证.
其他文献
[目的]通过大数据分析了解NAT1mRNA和蛋白质在结肠癌中的表达情况及对临床预后的影响.[方法]检索当前世界上几个主要的肿瘤生物信息数据库(Oncomine、TCGA、CPTAC等)中有关NAT1的相关数据,对其进行生物信息学分析,对NAT1在结肠癌中的临床作用进行荟萃分析.[结果]443项有关NAT1的不同类型研究结果纳入Onco-mine数据库,NAT1表达在肿瘤与其对照组织中有统计学差异的结果有37项,其中NAT1高表达的有12项,低表达的有25项.涉及到结肠癌的研究共有15项,且在结肠癌组织中均
[目的]分析替吉奥对胃癌前病变动物模型胃黏膜组织超微结构及肿瘤组织中Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.[方法]将40只SD大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(15只)和观察组(15只),模型组和观察组使用MNNG饮用液造模;造模成功后空白组和模型组使用蒸馏水干预,观察组使用替吉奥灌胃每,连续灌胃给药10 w;采用常规HE染色,观察各组胃黏膜组织超微结构;使用Western Blot法检测各组大鼠组织中Notch1、Delta样配体4(DLL4)、Jagged、Bcl-2、Bax及β-actin蛋白水平.
[目的]基于含Nod样受体家族含吡啶结构域蛋白3(Nod-like receptor family pyrin domain-containing 3,NLRP3)信号通路探讨丹参多酚酸(salvianolic acid,SA)对急性心力衰竭(acute heart failure,AHF)大鼠神经免疫的调节作用.[方法]大鼠分为对照组、AHF组、AHF+ SA组(N=15).通过一次性注射大量阿霉素(10 mg/kg)诱导AHR(10 mg/kg),SA灌胃(4 mg/kg,1次/d,2w).检测各组心
[目的]探讨磷脂酰肌醇3-激酶亚单位p110β(PI3K/p110β)和PTEN基因在前列腺癌中的表达.[方法]收集绵阳市中心医院2016年1月～2020年1月经手术切除的前列腺癌标本80例,取新鲜癌组织及癌旁组织作为实验样本.用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测癌及癌旁组织PI3K/p110β及PTEN基因相对表达量.[结果]前列腺癌标本中PBK/p110β mRNA及PTEN mRNA相对表达量分别为4.124±0.194及3.039±0.098,而癌旁组织中PI3K/p110β mRNA及PT
[目的]分析抑制Hippo通路对脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)大鼠模型海马神经元凋亡和学习记忆能力的影响.[方法] 36只大鼠随机分为Sham组、IRI组和IRI+ XMU-MP-1组(N=12).IRI组和IRI+XMU-MP-1通过“线栓法”建立IRI模型,IRI+ XMU-MP-1组腹腔注射XMU-MP-1 (2 mg/kg)干预.干预后通过水迷宫实验和跳台实验分析各组的大鼠的神经功能、学习和记忆能力.并比较海马神经元凋亡、组织中Hippo通路以及
有丝分裂是真核生物细胞遗传和增殖发育的基础,主要分为S期和M期,其中M期是细胞分裂和遗传物质传递的重要过程.染色体的正确分离受到多种细胞机制的高度调控,是保证子代细胞遗传信息完整性的关键.本文主要以典型的真核生物酵母细胞为研究模型,综述了酵母在有丝分裂过程中染色体分离异常形成非整倍体的具体机制.分别包括纺锤体组装监控机制失效、姐妹染色单体黏结蛋白缺陷、动粒-纺锤体微管结合错误和多中心体途径4个方面.并讨论了非整倍体现象对酵母细胞造成的影响,以期更好的理解非整倍体酵母的生理及遗传特性.
[目的]分析纳武利尤单抗联合来那度胺对EGFR敏感性突变肺癌细胞PD1/PD-L1信号通路表达及T细胞增殖的影响.[方法]常规复苏EGFR敏感性突变细胞株PC9、HCC827,野生型A549、H1299肺癌细胞,分离健康人群外周血的T细胞,建立共培养体系,采用酶联免疫吸附法检测PD-L1表达和T淋巴细胞增殖.[结果]来那度胺联合纳武利尤单抗处理EGFR突变肺癌细胞株PC9,HCC827Spd-L1蛋白表达水平显著低于单独使用来那度胺细胞[(0.83±0.02)比(0.46 ±0.05),(1.13±1.1
[目的]探讨胶乳免疫比浊法测肌酸激酶同工酶(CKMBmass)/总肌酸激酶(CK)比值在缺血性心血管疾病中的应用价值.[方法]选取笔者单位360例缺血性心血管疾病患者作为研究组,同期纳入60例健康体检者作为对照组.分析血清总CK、CKMBmass/总CK比值对缺血性心血管疾病诊断价值及其与预后关系.[结果]研究组血清总CK(250.49±43.82) U/L、CKMBmass/总CK比值(4.93±3.20)％、免疫抑制法CKMB/总CK比值(4.13±1.23)％高于对照组(197.71±32.11)U
人类生命早期的肠道已暴露在有菌环境中,正常的肠道菌群能够通过形成菌群屏障,分泌次生代谢产物,调节宿主免疫等方式维持肠道内环境稳态.而疫苗是一类通过宿主免疫应答而发挥作用的药物.疫苗与微生物之间的相互关系目前报道较少,近年研究发现肠道菌群会对疫苗制剂产生一定影响.本文回顾了肠道菌群与疫苗相互作用的研究进展,希望对疫苗研发提供理论基础与指导.
溶酶体是真核细胞内发挥降解功能的主要细胞器,它的功能异常与多种疾病密切相关.综述溶酶体与神经退行性疾病相关的研究进展,并重点从溶酶体酶、溶酶体pH调控和V-ATPase、溶酶体膜蛋白、溶酶体的细胞内定位等方面阐述溶酶体功能异常与神经退行性疾病的关系,为理解神经退行性疾病的机制提供新的视角,同时展望以溶酶体为靶点进行神经退行性疾病治疗和药物开发的广阔前景.