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目的
探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)上程序性死亡受体-1(PD-1)表达和PD-1启动子区域甲基化水平的差异及其影响因素,以及两者之间的关系。
方法筛选2009年9月至2011年9月在中南大学湘雅二医院传染科门诊就诊144例CHB患者和18名健康献血员,流式细胞术(FCM)检测PBMCs表面表达PD-1的细胞比例,同时进行肝功能检测;时间分辨荧光免疫分析法检测CHB患者血清HBV标志物水平,荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量;亚硫酸氢钠处理PBMCs细胞DNA,PCR扩增PD-1启动子基因片段,转化感受态大肠杆菌,挑克隆测序,检测扩增的PD-1启动子片段甲基化状态。
结果与正常对照组(10.8%±4.4%)比较,CHB患者PBMCs上PD-1表达水平明显升高。在CHB患者中,PBMCs上PD-1表达在HBeAg阳性患者(27.1%±18.4%)中显著高于HBeAg阴性患者(19.6%±15.6%),PD-1表达水平与HBV-DNA和A LT水平无明显相关性。PD-1启动子上多个CpG点(-601、-553、-538、-483、-463、-317 bp)甲基化程度与PD-1在单个核细胞上的表达呈负相关。
结论PD-1基因启动子区域甲基化水平可能影响CHB患者PBMCs上PD-1表达。