【摘 要】
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目的构建含TK基因逆转录病毒载体并检测其在转染细胞中的表达,为肺癌基因治疗积累实验资料.方法从PHSV106质粒中切下约2.4kb TK基因片段,插入逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点,
【机 构】
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第一军医大学珠江医院呼吸科,第三军医大学新桥医院全军呼吸研究所
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目的构建含TK基因逆转录病毒载体并检测其在转染细胞中的表达,为肺癌基因治疗积累实验资料.方法从PHSV106质粒中切下约2.4kb TK基因片段,插入逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点,酶切筛选正、反向连接质粒.正向连接子电穿孔法转化肺癌细胞A549,用PCR、细胞原位杂交法分别检测TK基因整合和表达.结果经酶切鉴定得到正向连接子,电穿孔法转导A549细胞,经G418筛选出了转基因细胞,TK基因已整合在转染细胞中并阳性表达.结论成功构建了含TK基因逆转录病毒载体,转导该载体的肺癌细胞可表达TK基因.
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