【摘 要】
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目的通过比较分拣蛋白相关受体1(SORL1)敲低细胞模型和传统的阿尔茨海默病(AD)细胞模型在细胞活力、细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β表达的变化,构建一种模拟AD的细胞模型。方法(
【基金项目】
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湖南省科技厅重点研发计划(2016JC2052),中南大学湘雅三医院新湘雅人才工程“至善领跑计划”(20150305),中南大学研究生自主探索创新项目(2017zzts888)
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目的通过比较分拣蛋白相关受体1(SORL1)敲低细胞模型和传统的阿尔茨海默病(AD)细胞模型在细胞活力、细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β表达的变化,构建一种模拟AD的细胞模型。方法(1)传统的AD细胞模型的构建:用Aβ25-35诱导N2a细胞并通过检测细胞活力确定最佳的AD细胞模型。(2)SORL1敲低细胞模型的构建:RNA干扰慢病毒载体及空病毒载体分别转染给N2a细胞,采用q RT—PCR和Western blot检测和鉴定细胞内SORL1转染的成功。(3)实验分组:对照组:未经干预的野生型N2a细胞;AD组:用Aβ25-35诱导的N2a细胞;空白组:用慢病毒空载体转染的N2a细胞;SORL1敲低组:SORL1-sh RNA慢病毒载体转染的N2a细胞。(4)MTT测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量。结果(1)AD组与对照组比较、SORL1敲低组与空白组比较、AD组和SORL1敲低组的细胞活力均降低、细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义(P<0.05);AD组与SORL1敲低组比较、对照组与空白组比较,细胞活力和细胞凋亡率均无差异(P>0.05)。(2)AD组与对照组比较、SORL1敲低组与空白组比较,AD组和SORL1敲低组的TNF-α和IL-1β含量均增加,差异有统计学意义(P<0.05);AD组与SORL1敲低组比较、对照组与空白组比较,TNF-α和IL-1β含量均无差异(P>0.05)。结论敲低N2a细胞SORL1的表达可能构建一种类似于Aβ诱导的AD细胞模型。
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