【摘 要】
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目的构建真核重组质粒N2ICD/p CMV-Tag4并转染HEK 293T细胞进行表达。方法根据GenBank上Notch2的NICD序列设计引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从人宫颈癌细胞Hela
【机 构】
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南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所,珠海南医大生物医药公共服务平台有限公司,
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目的构建真核重组质粒N2ICD/p CMV-Tag4并转染HEK 293T细胞进行表达。方法根据GenBank上Notch2的NICD序列设计引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从人宫颈癌细胞Hela细胞扩增人Notch2受体胞内区基因(N2ICD),酶切和测序鉴定后克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4并进行瞬时和稳定转染HEK 293T细胞,荧光定量PCR(Q-PCR)和蛋白印迹(WB)检测目的蛋白的表达。结果通过RT-PCR克隆获得人N2ICD基因并成功构建重组质粒N2ICD/pCMV-Tag4,目的蛋白N2ICD在HEK 293T细胞中获得表达。结论成功构建稳定表达N2ICD的HEK 293T细胞株,为进一步探讨Notch2受体的功能奠定基础。
Objective To construct eukaryotic recombinant plasmid N2ICD / p CMV-Tag4 and transfect it into HEK 293T cells for expression. Methods According to the NICD sequence of Notch2 in GenBank, primers were designed to amplify the human Notch2 receptor intracellular domain (N2ICD) from human cervical carcinoma Hela cells by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) After identification, the recombinant plasmid was cloned into FLAG-tagged eukaryotic expression vector pCMV-Tag4 and transiently and stably transfected into HEK 293T cells. The expression of target protein was detected by quantitative PCR (Q-PCR) and Western blotting (WB). Results The human N2ICD gene was cloned by RT-PCR and the recombinant plasmid N2ICD / pCMV-Tag4 was successfully constructed. The target protein N2ICD was expressed in HEK 293T cells. Conclusion The HEK 293T cell line stably expressing N2ICD was successfully constructed, which laid the foundation for further exploring the function of Notch2 receptor.
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