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通过正交设计对毕赤酵母GS115/pPICZαAN-hbsp工程菌的发酵条件(菌体密度、甲醇诱导浓度、初始pH值、诱导时间)进行优化。采用重组人骨唾液蛋白(recombinant human bone sialoprotein,rhBSP)单克隆抗体与Aldehyde-Resin HP FF介质偶联制备免疫亲和层析柱,纯化非融合型rhBSP,并用Western blotting和补体抑制实验检测非融合型rhBSP的抗原性和活性。毕赤酵母GS115/pPICZαAN-hbsp工程菌最佳发酵优化为:菌体密度O