核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuezhiyaodao
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利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR-2332 ORF6及部分ORF7 586 bp的cDNA。将PCR产物连接进线状克隆载体 pGEM-T easy vector后获阳性重组质粒。用EcoRI及SmaI双酶切阳性重组质粒DNA,回收463 bp的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对4头鼻内人工感染ATCC VR-2332的45日龄SPF猪感染后不同时间体内的PRRSV分布进行了研究。结果显示,在感染后30 h,即可在扁桃体、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏、胸腺、心脏、脑、淋巴结、鼻粘膜、胰腺、睾丸、附睾等组织中检出病毒,且一直持续至实验结束(人工感染后28 d)。应用探针对人工感染PRRSV北京分离株BJ-4的4头SPF猪及4例死胎的组织进行了检测,均可在肺门淋巴结、胸腺、脑、扁桃体等组织中发现阳性杂交信号。这些结果表明,制备的核酸探针可用于猪繁殖与呼吸综合症的临床诊断。
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