【摘 要】
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目的 分析百里醌对胶质瘤U87细胞生长抑制和凋亡诱导的功能.方法 体外胶质瘤细胞株U87以及人星形胶质细胞株NHA中添加不同浓度百里醌后,CCK-8法检测细胞活力;克隆形成实验观
【机 构】
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浙江省永康市第一人民医院神经外科,浙江金华321300
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目的 分析百里醌对胶质瘤U87细胞生长抑制和凋亡诱导的功能.方法 体外胶质瘤细胞株U87以及人星形胶质细胞株NHA中添加不同浓度百里醌后,CCK-8法检测细胞活力;克隆形成实验观察U87细胞形成细胞克隆的能力;流式细胞术检测细胞周期和ROS含量;Hoechst染色法和流式细胞术测定细胞凋亡;流式细胞术(JC-1荧光染色)观察细胞线粒体膜电位变化;Western blot试验检测U87细胞中细胞周期相关蛋白(Cyclin B1、Cdc2、Cdc25c、p53和p73)、细胞凋亡相关蛋白(Fas-L、Fas、Bax、tBid、PARP、caspase 9和caspase 3)和DNA损伤相关蛋白(p-ATM、p-ATR、γ-H2AX、p-Chk1、p-Chk2和p-p53)表达.结果 百里醌可显著抑制U87细胞活力和增殖,呈一定的剂量依赖关系,同时上调p-ATM、p-ATR、γ-H2AX、p-Chk1、p-Chk2和p-p53的表达;百里醌使U87细胞周期停滞在G2/M期,下调CyclinB1、Cdc2和Cdc25c的表达,同时上调p53和p73的表达;百里醌可诱导U87细胞发生凋亡,上调U87细胞线粒体膜电位,同时促进细胞中Fas-L、Fas、Bax、tBid、cleaved-PARP、cleaved-caspase 9和cleaved-caspase 3的表达;caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK可削弱百里醌的凋亡诱导作用;U87细胞内的ROS表达水平经百里醌作用得以上调,呈一定的剂量依赖关系,百里醌对U87细胞的促进凋亡功能在一定程度上被ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)逆转.结论 百里醌可抑制体外胶质瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡,其作用路径可能通过ROS通路实现.
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