【摘 要】
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目的 建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法.方法 根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,安徽农业大学动物科技学院,中国科学院广州生物医药与健康研究院
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目的 建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法.方法 根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应.用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较.结果 所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8 ng)左右.临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/2),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22).结论 本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高.
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