詹氏甲烷球菌DNA连接酶在大肠杆菌中的表达纯化及连接活性鉴定

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对一种耐热性古菌——詹氏甲烷球菌(Methanocaldococcus jannaschii)DNA连接酶进行了克隆、表达、纯化.并对其生物化学特性和酶学活性进行了初步研究.詹氏甲烷球菌DNA连接酶重组蛋白在ATP及Mg^2+二价阳离子存在的条件下具有连接酶活性,能够封闭DNA链上的切割.通过不同温度下的测试,50-80℃为较适合连接温度,其耐热性强,甚至在90℃下加热5min后仍有连接酶活性;其发挥活性的pH值范围比较宽泛.最适pH值为6.0~9.0.这是国际上对詹氏甲烷球菌DNA连接酶的首次报导.
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