小麦丛矮病毒(WRSV)的近全长cDNA基因文库的构建

来源 :中国病毒学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tananhua251
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用大肠杆菌poly(A)聚合酶,在纯化的小麦丛矮病毒的单链基因组RNA3′末端加多聚腺苷酸,以此RNA作模板,12-18寡聚脱氧胸核苷酸作引物,合成cDNA后,分别用限制性内切酶PstI和EcoRI对核cDNA酶切,同时再分别用PstI单酶和SmaI与EcoRI双酶对pUC载体酶切,经连接,转化感受态细胞,筛选和酶切鉴定后,共得到10种不同大小的非定向克隆,其大小之约14kb,同时还得到定向克隆4
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