【摘 要】
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目的 建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法 设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0b
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目的 建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法 设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0bp ,复性温度为 5 5 7℃。首先以 5 2℃的复性温度进行双向对数扩增 ,获得一定数量的双链DNA ,再以 72℃的复性温度进行单向扩增 ,获得单链DNA片段。以含HBVS基因片段的质粒为模板 ,在PCR体系中加入地高辛标记核苷酸直接制备探针 ,并收集 4 0份乙型肝炎患者的血清进行斑点杂交检测。结果 采用引物长度不对称PCR可成功地制备出单链探针且重复性好。对 4 0份乙型肝炎患者血清进行斑点杂交检测 ,HBVDNA检出率为 4 0 %。双链探针和单链探针的检出率一样 ,但单链探针的斑点更清晰 ,背景更好。结论 引物长度不对称PCR可能成为制备单链DNA片段或探针的简便而有效方法。单链探针具有高效和简便特点 ,有广阔的应用前景
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