【摘 要】
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目的 建立截短适配体-荧光法测定水中双酚A.方法 选择包含38个碱基的双酚A截短适配体为双酚A识别元件,在截短适配体的5\'端修饰荧光基团6-FAM,在互补序列cDNA的3 \'端修饰淬灭基团DABCYL,配制双酚A及干扰物标准溶液,优化互补序列cDNA的碱基个数、截短适配体与互补序列cDNA的浓度比、孵育温度、孵育时间和缓冲液pH值,建立截短适配体-荧光法检测体系,进行特异性与回收率实验.结果 当互补序列cDNA包含9个碱基,截短适配体与互补序列cDNA的浓度比为1∶1.5,缓冲溶液pH值为7.
【机 构】
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杭州医学院公共卫生学院,浙江杭州310013
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目的 建立截短适配体-荧光法测定水中双酚A.方法 选择包含38个碱基的双酚A截短适配体为双酚A识别元件,在截短适配体的5\'端修饰荧光基团6-FAM,在互补序列cDNA的3 \'端修饰淬灭基团DABCYL,配制双酚A及干扰物标准溶液,优化互补序列cDNA的碱基个数、截短适配体与互补序列cDNA的浓度比、孵育温度、孵育时间和缓冲液pH值,建立截短适配体-荧光法检测体系,进行特异性与回收率实验.结果 当互补序列cDNA包含9个碱基,截短适配体与互补序列cDNA的浓度比为1∶1.5,缓冲溶液pH值为7.5,55℃孵育60 min时,10～ 75 pmol/L浓度范围内,双酚A的线性关系较好,线性回归方程为y=2230.7x+110825,相关系数为0.926,检出限为3.3 pmol/L.四溴双酚A、雌二醇、雌三醇和双酚S等4种干扰物与双酚A的荧光强度差值区别较明显,对检测结果未造成明显干扰.当加标浓度为20.0、40.0和60.0 pmol/L时,回收率分别为97.8％、98.8％和102.3％,相对标准偏差分别为4.4％、2.1％和2.6％.结论 建立的截短适配体-荧光法操作简便,灵敏度高,特异性强,可用于检测水中双酚A.
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