基于“阴静阳躁”理论探讨熟地黄对注意缺陷多动障碍大鼠前额叶皮质能量代谢的影响

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基于“阴静阳躁”理论观察熟地黄对注意缺陷多动障碍(attentional deficit hyperactivity disorder, ADHD)模型幼龄自发性高血压病大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)前额叶皮质(prefrontal cortex, PFC)能量代谢及其调控机制的影响。将30只3周龄SHR雄性大鼠随机分为模型组、哌醋甲酯(methylphenidate, MPH)组、熟地黄组,同周龄京都(Wistar-Kyoto, WKY)雄性大鼠为正常组,每组10只;正常组、模型组予同体积0.9%羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethyl cellulose, CMC-Na)溶液灌胃,MPH组、熟地黄组分别予MPH(2 mg·kg-1)、熟地黄(2.4 g·kg-1)灌胃,每日1次。给药前、给药第4周时分别采用开场实验评估大鼠自发性行为。给药4周后,分离PFC制备线粒体,采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)测定PFC中三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate, ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate, AMP)水平,计算能荷(energy charge, EC)值;Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能相关参数:Ⅲ态呼吸(state3 respiration, ST3)、Ⅳ态呼吸(state 4 respiration, ST4)与呼吸控制指数(respiratory control rate, RCR);化学比色法测定线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH)、细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase, COX)、Na +-K +-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性;采用分光光度法测定线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, mPTP)开放程度;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PFC中葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT)1和GLUT3的表达水平。结果显示,与模型组相比,熟地黄可以显著降低SHR大鼠在开场实验中的总运动距离、直立次数及中心区域运动距离,升高大鼠脑组织ATP及EC水平、降低AMP水平(P<0.05),升高ST3耗氧率、RCR(P<0.05或P<0.01),明显升高SDH、COX、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性(P<0.05或P<0.01),抑制线粒体通透性转换孔开放,提高GLUT1及GLUT3蛋白表达水平(P<0.05)。推测熟地黄可能通过改善ADHD模型大鼠PFC存在的能量代谢障碍而抑制其多动、冲动,其机制可能与改善线粒体呼吸功能,提高Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶及线粒体呼吸酶活性,抑制线粒体通透性转换孔开放,提高葡萄糖转运蛋白表达有关,初步揭示了ADHD“阴静阳躁”理论的现代生物学内涵。
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