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优化实验条件,建立大鼠胚胎整体原位杂交方法.E8.5～E10.5大鼠胚胎4％多聚甲醛固定6h,不经蛋白酶K消化;E11.5～E12.5胚胎4％多聚甲醛固定过夜,蛋白酶K系列稀释实验确定消化浓度和时间.E8.5～E12.5胚胎预杂交2h,地高辛标记的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探针杂交24 h,山羊血清封闭2.5～3 h,地高辛抗体4℃过夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2 h,NBT/BCIP避光显色.