蛋白质O-GlcNAc修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用

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目的

评价蛋白质糖基化(O-GlcNAc)修饰在氧糖剥夺/复氧复糖小鼠神经细胞氧化应激损伤中的作用。

方法

标准小鼠海马神经细胞系,以5×104个/ml的密度接种于培养板或培养皿,采用随机数字表法分为4组(n=20):正常组(N组)、O- (连接) N-乙酰葡糖胺水解酶(OGA)抑制剂Thiamet G组(T组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(D/R组)以及Thiamet G 氧糖剥夺/复氧复糖组(T-D/R组)。采用低糖培养基在94%N2-5%CO2-1%O2混合气体培养6 h进行糖氧剥夺,随后更换正常培养基进行复氧复糖12 h。T-D/R组在氧糖剥夺/复氧复糖前4 h时细胞培养液中加入终浓度1 mmol/L的Thiamet G,T组于提取细胞蛋白前4 h换成含终浓度1 mmol/L Thiamet G的培养基。复氧复糖完成后,采用DCFH-DA染色法检测细胞ROS累积量,Jc-1染色法检测线粒体膜电位,免疫荧光法检测O-GlcNAc修饰水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p53抑癌基因(p53)表达水平。

结果

与N组比较,T组神经细胞O-GlcNAc表达上调,D/R组神经细胞ROS累积量增多,JC-1单体升高,JC-1聚合物降低,Nrf2表达下调,p-JNK、p53表达上调,T-D/R组神经细胞O-GlcNAc表达上调,ROS累积量增多,JC-1单体与JC-1聚合升高,Nrf2表达下调,p-JNK、p53表达上调(P

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