蜜蜂畸翅病毒SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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为建立蜜蜂畸翅病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT—PCR检测方法,通过构建蜜蜂畸翅病毒(DWV)RDRP基因部分序列的标准质粒作为模板,进行了标准曲线的建立,并对所建立方法进行了特异性和灵敏度测试。结果表明:所建立的荧光定量RT—PCR扩增效率E=100%,R^2=0.999,最低检出量为100个拷贝;该方法仅能检出DWV病毒,而不能检测出蜜蜂黑王台病毒、囊状幼虫病毒,具有很好的特异性。表明已成功建立了特异灵敏的DWV实时荧光定量RT—PCR检测方法。采用所建方法对昆明部分蜂场进行了DWV感染状况调查,结果表明昆明地区东方蜜蜂带毒率为54%,提示DWV病毒在昆明地区东方蜜蜂中存在流行。
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