【摘 要】
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目的 检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法 采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳
【机 构】
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南京医科大学口腔医院口腔内科,浙江省嘉兴市第一医院口腔科,四川大学华西口腔医院口腔内科,广东省口腔医院口腔内科,四川大学华西口腔医院口腔颌面外科 210029
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目的 检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法 采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ,获得稳定转染的细胞。酶联免疫吸附实验 (ELISA)对重组质粒在COS_1和CHO细胞表达产物的含量进行检测。结果 G4 18筛选获得稳定转染的COS_1和CHO细胞 ,对照组加压后第10~ 2 0天细胞全部死亡。转染组第 15~ 2 3天汇片达 80 %左右。转染组细胞培养液和冻融液中sIL_1R表达量均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论 以sIL_1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系中具有表达功能。
Objective To detect the expression of recombinant plasmid pcDNA3 sIL_1R (I) in mammalian cell lines COS_1 and CHO cells. Methods The constructed pcDNA3 sIL_1R (I) plasmid DNA was introduced into mammalian cell lines COS_1 and CHO cells cultured in vitro by lipofectamine mediated transfection. Transfected cells were pressure-screened by addition of G418 to obtain stably transfected cells. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the expression of recombinant plasmids in COS 1 and CHO cells. Results Stably transfected COS_1 and CHO cells were screened by G418, and the cells in the control group died on the 10th to 20th day after being pressurized. Transfection group, the first 15 ~ 23 days, about 80% of the pieces. Transfection group cell culture fluid and freeze-thaw fluid sIL_1R expression were significantly higher than the control group (P <0 05). Conclusion The constructed recombinant plasmid pcDNA3 sIL_1R (I) with sIL_1R extracellular mature peptide gene as the target gene has the function of expression in mammalian cell lines.
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