【摘 要】
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以羊种布鲁菌043株基因组为模板,利用PCR扩增二氢硫辛酰胺脱氢酶(BMEI0145)基因,连接pMD18-T载体后测序,将测序正确的基因片段经双酶切后克隆至pET-28a载体中,转化大肠埃希菌
【机 构】
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石河子大学动物科技学院,新疆地方与民族高发病教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31360610)
论文部分内容阅读
以羊种布鲁菌043株基因组为模板,利用PCR扩增二氢硫辛酰胺脱氢酶(BMEI0145)基因,连接pMD18-T载体后测序,将测序正确的基因片段经双酶切后克隆至pET-28a载体中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果显示,成功克隆了BMEI0145基因,片段大小为1 404bp;SDS-PAGE显示,BMEI0145蛋白分子质量约为62ku;Western blot分析显示,BMEI0145蛋白可与布鲁菌阳性血清发生特异性反应。表明成功获得了BMEI 0145蛋白,该蛋白具有与布鲁菌自身蛋白相同的抗原性,为进一步研究布鲁菌基因工程疫苗和布鲁菌病的诊断奠定了基础。
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