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【摘 要】 目的：建立盆炎净胶囊中忍冬藤药材马钱苷的定性与定量检测方法，并制定质量标准。方法：采用薄层色谱法，以忍冬藤对照药材、马钱苷为参照，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，建立其定性鉴别方法;采用高效液相色谱法，以马钱苷为对照，WatersT3 C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液（13∶[KG-*3/5]87）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为235nm，柱温25 ℃，测定盆炎净胶囊中马钱苷的含量。结果：TLC法斑点清晰，分离效果好;马钱苷在3.66～32.90μg/mL范围内呈良好的线性关系，r=0.9998;平均回收率为100.08%、RSD为0.22%。结论：本法简捷、快速、可行、重复性好，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材马钱苷的质量控制提供依据。
【关键词】 盆炎净胶囊;马钱苷;TLC;HPLC;定量与定性
【中图分类号】R284.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）3-0041-03
Abstract：Objective To establish a qualitative and quantitative analysis of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule，and establish quality Standards.Methods A TLC method was used as the qualitative identification of Penyanjing capsule by using Honeysuckle rattan control medicine and loganin as reference，and the upper solution of ethyl acetate-acetic acid-water（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5））as developing solvents.An HPLC method was used，Loganin was used as reference;Waters T3C18（4.6mm×250mm，5μm） as analytical column and acetonitrile-0.5% acetic acid solution as mobile phaseat theflow rate of 1.0 ml/min ; Detecting wavelength was set at 235nm. The temperature of column was at 25℃.Restults The spots were well separated clear by the TLC method.Loganin was linear in the range of 3.66～32.90μg/mL，r=0.9998. The average recoveries of Loganin was 100.08% with the RSD of 0.22%.Conclusion The simple，fast，feasible and reproducible method can be a basis of quality control of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule.
Keywords：Pen Yan Jing Capsule;Loganin;TLC;HPLC;Quality and Quantity
盆炎凈胶囊由忍冬藤、蒲公英、狗脊、赤芍、车前草等八味中药材组成[1-2]，具有清热利湿、和血通络、调经止带之功效，用于湿热下注、白带过多等症状[2]。作为中药复方制剂具有药味较多，现有标准对忍冬藤药材只做忍冬藤对照药材定性鉴别。因此，笔者对忍冬藤药材中马钱苷成分进行定性与定量分析研究，并进行方法学考察，建立质量标准，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控标准。
1 仪器与材料
1.1 仪器 美国Agilent LC-1260高效液相色谱议（包括四元泵，二极管矩阵检测器，柱温箱，自动进样器，Agilent工作站和处理软件），WatersT3 C18（250mm×4.6mm，5μm）柱;AB204-S型梅特勒电子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-500DV型数控超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 材料 忍冬藤对照药材、马钱苷对照品（批号：111640-201808） 购于中国食品药品检定研究院，乙睛为色谱纯，水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，3批盆炎净胶囊（批号：170401、170402、170403）遵义华卫制药提供，阴性样品自制。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别[3-4] 取本品粉末约2.0g，加乙醇15mL，超声40min，滤过，滤液浓缩近1mL，作为供试品溶液。另取忍冬藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马钱苷对照品，加乙醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰。如图1所示。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件[5-9] WatersT3 C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液（13∶[KG-*3/5]87）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为235nm，柱温25 ℃。进样量10μL，相连两峰分离度为达4.4，理论塔板数按马钱苷计，应不低于3000。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取马钱苷照品适量，加甲醇溶解制成马钱苷18.28μg/mL对照品溶液，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 供试品溶液制备 取内容物约2.0g（批号：170401），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，超声处理50min，取出，放冷，用甲醇补足重量，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性溶液制备 取缺忍冬藤药材处方下自制阴性样品，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在马钱苷相应的保留时间无干扰峰，详见色谱图2、图3、图4。
2.2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品混合溶液2、6、10、14、18μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以马钱苷浓度（μg）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归方程为：Y=26.864X+0.9979，R=0.9998，在3.66～32.90mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定6次，记录峰面积，结果马钱苷峰面积的RSD为0.16%，结果表明仪器精密度良好。
2.2.7 稳定性试验 分别吸取（批号：170401）同一供试品溶液于0、2、4、8、12h精密吸（批号：170401）样品制备的供试品溶液10μL进样，测得峰面积，RSD均值为1.10%，表明在12h内稳定。
2.2.8 重复性试验 取同一批样品（批号：170401）6份，[JP]精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液。测定峰面积，计算马钱苷平均含量为350.27μg/g，RSD为1.16%，结果表明重复性好。
2.2.9 加樣回收试验 取已知含量（含马钱苷350.27μg/g）的样品6份，每份约1.0g，精密称定，精密马钱苷对照品适量，按“2.2.3”项下的方法操作，计算回收率，马钱苷平均回收率为100.08%，RSD为0.22%，详见表1。
2.2.10 含量测定 3批样品结果详见表2。
3 讨论
通过盆炎净胶囊中忍冬藤的研究，笔者增加忍冬藤药材中马钱苷作为对照，进行定性与定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，展开效果好，与各斑点均能有效分离，斑点显色清晰，且阴性无干扰;采用HPLC法测定处方中忍冬藤药材有效成分马钱苷，供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间阴性无干扰。
对甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙睛—水、乙睛-醋酸溶液4个系统的流动相考察结果表明，乙睛-0.5%醋酸溶液梯度洗脱效果最好。同时采用DAD检测器进行紫外区全波长扫描，在2235nm、325nm波长下有最大吸收，根据所测目标峰在235nm波长下检测，分离好，峰面积较大，因此选择235nm为本实验的检测波长。
综上所述，TLC法以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，各斑点能有效的分离，斑点显色清晰，阴性无干扰;HPLC法测定处方中有效成分马钱苷的含量，以乙睛-0.5%醋酸溶液（13∶[KG-*3/5]87）为流动相，其马钱苷分离效果好，干扰成分少，基线平稳;样品处理简单，分析速度快，数据准确，结果可靠，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控提供依据。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：193.
[2]国家食品药品监督管理局标准.盆炎净胶囊标准YBZ07682006[S].2006
[3]冯华，石尚友，罗秀琼，等，苗药复方胃痛胶囊中吴茱萸的定性与定量分析[J].甘肃中医药大学学报，2017，33（4）：30-33.
[4]冯华，石尚友，罗秀琼，等，黔产大菟丝子中绿原酸的定性与定量分析[J].中国民族民间医药，2017，26（5）：14-16.
[5]袁志鹰，杨岩涛，李荣东，等.HPLC同时测定盆炎净胶囊中3种有效成分含量[J].中国中医药信心杂志，2017，24（5）：82-85.
[6]湛文青，李虹.HPLC法测定盆炎净胶囊中绿原酸含量[J].广东药学，2004，14（1）：11-13.
[7]徐英辉，申茹，郭玉岩.忍冬藤胶囊的制备及其质量标准[J].中成药，2019，41（8）：1790-1794.
[8]甄亚钦，冯玉，田伟，等.忍冬不同部位 UPLC 指纹图谱及化学模式识别研究[J].中草药，2019，50（18）：4449-4454.
[9]路俊仙，吕凌，张才波.忍冬4个药用部位中11种化学成分的含量测定[J].中药材，2019，42（5）：1085-1089.
【关键词】 盆炎净胶囊;马钱苷;TLC;HPLC;定量与定性
【中图分类号】R284.2 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2020）3-0041-03
Abstract：Objective To establish a qualitative and quantitative analysis of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule，and establish quality Standards.Methods A TLC method was used as the qualitative identification of Penyanjing capsule by using Honeysuckle rattan control medicine and loganin as reference，and the upper solution of ethyl acetate-acetic acid-water（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5））as developing solvents.An HPLC method was used，Loganin was used as reference;Waters T3C18（4.6mm×250mm，5μm） as analytical column and acetonitrile-0.5% acetic acid solution as mobile phaseat theflow rate of 1.0 ml/min ; Detecting wavelength was set at 235nm. The temperature of column was at 25℃.Restults The spots were well separated clear by the TLC method.Loganin was linear in the range of 3.66～32.90μg/mL，r=0.9998. The average recoveries of Loganin was 100.08% with the RSD of 0.22%.Conclusion The simple，fast，feasible and reproducible method can be a basis of quality control of loganin from Caulis Loniceraein Penyanjing capsule.
Keywords：Pen Yan Jing Capsule;Loganin;TLC;HPLC;Quality and Quantity
盆炎凈胶囊由忍冬藤、蒲公英、狗脊、赤芍、车前草等八味中药材组成[1-2]，具有清热利湿、和血通络、调经止带之功效，用于湿热下注、白带过多等症状[2]。作为中药复方制剂具有药味较多，现有标准对忍冬藤药材只做忍冬藤对照药材定性鉴别。因此，笔者对忍冬藤药材中马钱苷成分进行定性与定量分析研究，并进行方法学考察，建立质量标准，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控标准。
1 仪器与材料
1.1 仪器 美国Agilent LC-1260高效液相色谱议（包括四元泵，二极管矩阵检测器，柱温箱，自动进样器，Agilent工作站和处理软件），WatersT3 C18（250mm×4.6mm，5μm）柱;AB204-S型梅特勒电子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-500DV型数控超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 材料 忍冬藤对照药材、马钱苷对照品（批号：111640-201808） 购于中国食品药品检定研究院，乙睛为色谱纯，水为娃娃哈纯净水，其他试剂均为分析纯，3批盆炎净胶囊（批号：170401、170402、170403）遵义华卫制药提供，阴性样品自制。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别[3-4] 取本品粉末约2.0g，加乙醇15mL，超声40min，滤过，滤液浓缩近1mL，作为供试品溶液。另取忍冬藤对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取马钱苷对照品，加乙醇制成每1mL含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法2015年版《中国药典》四部通则0502试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，而阴性无干扰。如图1所示。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件[5-9] WatersT3 C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱，乙睛-0.5%醋酸水溶液（13∶[KG-*3/5]87）为流动相，流速1.0mL/min，检测波长为235nm，柱温25 ℃。进样量10μL，相连两峰分离度为达4.4，理论塔板数按马钱苷计，应不低于3000。 2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取马钱苷照品适量，加甲醇溶解制成马钱苷18.28μg/mL对照品溶液，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 供试品溶液制备 取内容物约2.0g（批号：170401），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL，超声处理50min，取出，放冷，用甲醇补足重量，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性溶液制备 取缺忍冬藤药材处方下自制阴性样品，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件下测定，结果表明阴性对照的色谱图在马钱苷相应的保留时间无干扰峰，详见色谱图2、图3、图4。
2.2.5 线性关系的考察 精密吸取对照品混合溶液2、6、10、14、18μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以马钱苷浓度（μg）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归方程为：Y=26.864X+0.9979，R=0.9998，在3.66～32.90mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.2.6 精密度试验 精密吸对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定6次，记录峰面积，结果马钱苷峰面积的RSD为0.16%，结果表明仪器精密度良好。
2.2.7 稳定性试验 分别吸取（批号：170401）同一供试品溶液于0、2、4、8、12h精密吸（批号：170401）样品制备的供试品溶液10μL进样，测得峰面积，RSD均值为1.10%，表明在12h内稳定。
2.2.8 重复性试验 取同一批样品（批号：170401）6份，[JP]精密称定，按照“2.2.3”项下方法制备成供试品溶液。测定峰面积，计算马钱苷平均含量为350.27μg/g，RSD为1.16%，结果表明重复性好。
2.2.9 加樣回收试验 取已知含量（含马钱苷350.27μg/g）的样品6份，每份约1.0g，精密称定，精密马钱苷对照品适量，按“2.2.3”项下的方法操作，计算回收率，马钱苷平均回收率为100.08%，RSD为0.22%，详见表1。
2.2.10 含量测定 3批样品结果详见表2。
3 讨论
通过盆炎净胶囊中忍冬藤的研究，笔者增加忍冬藤药材中马钱苷作为对照，进行定性与定量分析。在TLC中以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，展开效果好，与各斑点均能有效分离，斑点显色清晰，且阴性无干扰;采用HPLC法测定处方中忍冬藤药材有效成分马钱苷，供试品色谱中，在与对照品色谱相应保留时间阴性无干扰。
对甲醇-水、甲醇-醋酸溶液、乙睛—水、乙睛-醋酸溶液4个系统的流动相考察结果表明，乙睛-0.5%醋酸溶液梯度洗脱效果最好。同时采用DAD检测器进行紫外区全波长扫描，在2235nm、325nm波长下有最大吸收，根据所测目标峰在235nm波长下检测，分离好，峰面积较大，因此选择235nm为本实验的检测波长。
综上所述，TLC法以乙酸乙酯-冰醋酸-水（12∶[KG-*3/5]3∶[KG-*3/5]5）上层溶液为展开剂，各斑点能有效的分离，斑点显色清晰，阴性无干扰;HPLC法测定处方中有效成分马钱苷的含量，以乙睛-0.5%醋酸溶液（13∶[KG-*3/5]87）为流动相，其马钱苷分离效果好，干扰成分少，基线平稳;样品处理简单，分析速度快，数据准确，结果可靠，可作为盆炎净胶囊中忍冬藤药材质量内控提供依据。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：193.
[2]国家食品药品监督管理局标准.盆炎净胶囊标准YBZ07682006[S].2006
[3]冯华，石尚友，罗秀琼，等，苗药复方胃痛胶囊中吴茱萸的定性与定量分析[J].甘肃中医药大学学报，2017，33（4）：30-33.
[4]冯华，石尚友，罗秀琼，等，黔产大菟丝子中绿原酸的定性与定量分析[J].中国民族民间医药，2017，26（5）：14-16.
[5]袁志鹰，杨岩涛，李荣东，等.HPLC同时测定盆炎净胶囊中3种有效成分含量[J].中国中医药信心杂志，2017，24（5）：82-85.
[6]湛文青，李虹.HPLC法测定盆炎净胶囊中绿原酸含量[J].广东药学，2004，14（1）：11-13.
[7]徐英辉，申茹，郭玉岩.忍冬藤胶囊的制备及其质量标准[J].中成药，2019，41（8）：1790-1794.
[8]甄亚钦，冯玉，田伟，等.忍冬不同部位 UPLC 指纹图谱及化学模式识别研究[J].中草药，2019，50（18）：4449-4454.
[9]路俊仙，吕凌，张才波.忍冬4个药用部位中11种化学成分的含量测定[J].中药材，2019，42（5）：1085-1089.