【摘 要】
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利用大肠杆菌原核表达系统表达的羊肝片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)为诊断抗原,建立羊肝片吸虫感染Dot-ELISA检测方法。结果显示:重组蛋白约为30
【机 构】
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浙江大学动物科学学院/浙江省动物预防医学重点实验室;
【基金项目】
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浙江省重大科技专项重点农业项目(2012C12009-2);国家“973”计划资助项目(2015CB150300)
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利用大肠杆菌原核表达系统表达的羊肝片吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase,TPx)为诊断抗原,建立羊肝片吸虫感染Dot-ELISA检测方法。结果显示:重组蛋白约为30 000;各组分的最适反应条件为:抗原最适包被量为0.28μg/片,血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶400和30min,酶标二抗最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min,血清和酶标二抗最佳反应温度均为37℃,最适封闭液和封闭条件分别为2%BSA-TBS和37℃2h,最佳显色时间30min。该方法特异性较强、灵敏度高、重复性好。运用该方法对浙江海宁和桐乡共200份羊血清样本进行检测,阳性率为1.5%。结果表明:本试验应用重组蛋白TPx通过PVDF(聚偏氟乙烯微孔)膜固相载体建立了羊肝片吸虫Dot-ELISA检测方法。
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