论文部分内容阅读
目的 建立大鼠肝微粒体中细胞色素P450 (CYP) 2D6酶活性的检测方法,以右美沙芬为探针底物进行体外酶动力学分析,为相关药物代谢研究提供参考依据.方法 采用高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)方法提高检测灵敏度.通过优化大鼠肝微粒体孵育体系的反应条件,建立稳定的动力学评价方法.以Graphpad prism 5.01软件绘制米曼动力学曲线并计算Vmax与Km值.结果 右美沙芬与其代谢产物右啡烷分离良好且无其他内源性物质干扰.右啡烷检测限为5 nmol·L-1 (S/N＞3),定量下限为0.015 μmol·L-1,线性范围为0.015 ～ 7.5 μmol·L-1.测定方法重现性好且稳定.经优化条件后测定,不同浓度的右美沙芬在0.2 mg· mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,测得动力学参数V一为(1.075±0.060) nmol·min-1·mg-1 pro,Km为(7.470±0.983) μmol·L-1.结论 高效液相色谱结合荧光检测法可以有效提高灵敏度,此大鼠微粒体孵育体系的建立可应用于体外CYP2D6酶活性的测定及酶动力学研究.