【摘 要】
：
目的 建立体外获得唾液酸化路易斯抗原X(SLeX)ssDNA适配子(aptamers)的方法.方法 构建长度为70 nt的初始随机单链DNA库,其中含30个随机序列,以溴化氰活化的琼脂糖小球为筛选介质,运用指数富集配体的系统进化技术(SELEX技术)获得SLeX的ssDNA适配子.将适配子库克隆、测序,采用DNAMAN软件对其结构进行分析,通过生物素-亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定适配子与SL
【机 构】
：
江苏省盱眙县人民医院肿瘤科,211700,430071,武汉大学中南医院肿瘤外科,肿瘤生物学行为湖北省重点实验室,430071,武汉大学中南医院肿瘤外科,肿瘤生物学行为湖北省重点实验室,430071,
论文部分内容阅读
目的 建立体外获得唾液酸化路易斯抗原X(SLeX)ssDNA适配子(aptamers)的方法.方法 构建长度为70 nt的初始随机单链DNA库,其中含30个随机序列,以溴化氰活化的琼脂糖小球为筛选介质,运用指数富集配体的系统进化技术(SELEX技术)获得SLeX的ssDNA适配子.将适配子库克隆、测序,采用DNAMAN软件对其结构进行分析,通过生物素-亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定适配子与SLeX的亲和力.结果 经逐轮筛选,所得富集库与SLeX的亲和力逐步提高(A值从0.145增加到了0.460),大部分适配子克隆测序后与预期相符.结论 经9轮筛选获得的ssDNA适配子与SLeX的体外结合有高度的特异性及亲和力。
其他文献
目的 分析草酸钙尿石症患者肾组织γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)基因启动子序列多态性,并探讨该序列变化对启动子活性的影响.方法分别以42例草酸钙尿石症患者肾组织(尿石组)与31例非结石肾组织(肾肿瘤癌旁正常组织,对照组)基因组DNA为模板,PCR扩增GGCX基因5'-侧翼启动子区1329 bp片段(-1270～+58 bp),电泳鉴定后,分别对两组PCR产物测序.筛选差异启动子序列克隆至萤光素酶报告
目的 用Ad5F35载体制备携带前强啡肽基因的重组腺病毒Ad5F35-PDP并对其进行鉴定.方法 利用NheI和Agel分别对合成的目的 基因prodynorphin聚合酶链反应(PCR)产物和pDC316-LacZ-a载体质粒进行双酶切.将PDP目的 基因片段和线性化的pDC316连接,克隆构建pDC316-PDP.pDC316-PDP与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞制备
目的 观察共刺激分子4-1 BBL在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌细胞株4-1 BBL mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测人淋巴细胞对不同胃癌细胞的体外杀伤活性;酶联免疫吸附试验(ELISA
目的 将人骨保护蛋白(OPG)基因转入体外培养的人成骨细胞,研究OPG基因在转染成骨细胞中的表达,并分析OPG基因转染对成骨细胞生物学行为的影响.方法 首先行人成骨细胞体外培养,然后用质粒peDNA3.1-hOPG转染成骨细胞,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测转染细胞OPG mRNA和蛋白质的表达.观察OPG基因转染后成骨细胞的增殖情况,对成骨细胞表达的碱性磷
中华实验外科杂志第六届编委会第一次全体会议于2009年8月28至29日在武汉召开.本届编委会136位编委、通讯编委出席了会议.中华医学会杂志社蔡丽枫副社长宣布了本刊第六届编委会组成名单,并代表中华医学会向第六届编委会成员颁发了聘书.蔡丽枫副社长在祝贺第六届编委会成立的同时,强调本刊的发展是同历届编委、审稿专家,尤其是第五届编委所作的贡献密不可分的,希望他们继续关心、支持本刊工作。
目的 观察骨形成发生蛋白4（BMP4）和Smad4在阿霉素诱导U251细胞抑制中的表达变化。方法应用噻唑蓝（MTT）检测空白组和阿霉素组U251细胞增长活性，应用公式（1-阿霉素组A／空白组A）×100％计算阿霉素组U251细胞增长抑制率。应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测空白组和阿霉素组BMP4和Smad4的表达。结果阿霉素在24、36、48、60、72h对细胞抑制
在中国,胰腺癌发病率逐渐增加,目前其肿瘤相关致死率已跃居第6位[1].早期发现是胰腺癌得以及时治疗的前提之一.目前缺乏理想的胰腺癌血清学标志物.蛋白质组学为肿瘤研究提供了新的思维和技术平台[2].在本研究中,我们初步探讨了二维电泳及质谱法筛选胰腺癌血清标志物中的应用,并希望发现一些与胰腺癌相关的标志物,为胰腺癌的早期诊断提供线索。
大鼠30%减体积肝移植模型是临床亲体肝移植、劈离式肝移植等实验研究的重要工具[1].供肝修整时切除左外叶、中间叶达到减体积目的是目前普遍采用的方法"[1,2],我们以体内外联合切除法建立大鼠30%减体积移植模型,探讨其优越性。
目的 观察131Ⅰ-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型肿瘤生长的抑制作用.方法采用过氧化氢标记法制备131Ⅰ-17-AAG;将30只荷瘤裸鼠随机分成3组:131Ⅰ-17-AAG治疗组,二甲基亚砜(DMSO)对照组和单纯Na131Ⅰ治疗组.尾静脉注射相应试剂后,观察28 d,比较肿瘤的体积,计算抑瘤率;Western blot检测肿瘤组织Akt2蛋
本研究旨在利用神经干细胞(NSCs)作为基因的传递载体,观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统在体外对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。