含绿色荧光蛋白报告基因的TIMP-2真核表达载体的构建及其在人成釉细胞瘤中的表达

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目的 构建含有绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的TIMP-2真核表达载体PcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2,并探讨其在成釉细胞瘤(AB)中的表达情况.方法 应用RT-PCR技术从体外培养的人AB中获得TIMP-2目的基因片段,采用分子克隆技术构建该基因的真核表达载体PcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2,并以脂质体为介导转染至体外培养的人AB细胞.流式细胞仪测定转染效率,倒置相差荧光显微镜观察绿色荧光,RT-PCR检测转染前后TIMP-2 mRNA的表达量的改变.结果 构建的PcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2经酶切和测序鉴定证明和预期结果一致.PcDNA3.1(+)-TIMP-2转染人AM细胞后TIMP-2 mRNA的表达量增加. 结论 成功构建TIMP-2真核表达载体PcDNA3.1(+)/GFP-TIMP-2并转染至人AB细胞。

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