探讨可溶性程序性死亡配体1(sPD–L1)对人T淋巴细胞增殖的影响及其机制。
方法健康人外周血中分离得到T淋巴细胞，用植物血凝素(PHA)活化T淋巴细胞；实验分为5组：A：静止T淋巴细胞组、B：活化T淋巴细胞组、C：活化T淋巴细胞＋PD–L1融合蛋白(sPD–L1Ig)组、D：活化T淋巴细胞＋sPD–L1Ig＋同型对照抗体(mIgG)组、E：活化T淋巴细胞＋sPD–L1Ig＋鼠抗人程序性死亡配体1(PD–L1)阻断型抗体(2H11)组。通过细胞计数试剂盒(CCK–8法)测定各组T淋巴细胞的吸光度(A)值，流式细胞术检测sPD–L1对T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响，Western印迹法分析程序性死亡受体1(PD–1)信号传导基序酪氨酸磷酸化程度，免疫沉淀技术进一步分析信号接头分子蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP)–1和SHP–2的募集量，探讨sPD–L1激发PD–1抑制信号的机制。
结果CCK–8法体外实验结果显示：在sPD–L1Ig浓度为250 ng/ml时，A～E组A值分别为0.42±0.03、1.20±0.06、0.87±0.05、0.78±0.05、1.11±0.09；C组显著低于B组(t＝3.946，P＝0.017)，E组显著高于D组(t＝3.139，P＝0.035)。A～E组G1期细胞百分比分别为(94.49±0.50)%、(79.22±0.50)%、(89.62±0.33)%、(92.89±0.80)%、(87.94±0.87)%，C组显著高于B组(t＝17.310，P<0.001)。各组细胞凋亡率分别为(35.77±1.82)%、(35.20±2.70)%、(62.77±0.24)%、(64.47±0.44)%、(36.80±3.53)%；C组显著高于B组(t＝10.160，P＝0.001)，E组显著低于D组(t＝7.790，P＝0.002)。SHP–1、SHP–2在各组细胞中的表达量差异均无统计学意义(均P>0.05)。C组磷酸化SHP–1(p–SHP–1)、p–SHP–2表达量均显著高于B组(t＝10.790，P<0.001；t＝13.051，P<0.001)；E组p–SHP–1显著低于D组(t＝3.361，P＝0.028)。
结论sPD–L1可有效抑制T淋巴细胞的增殖，PD–1/sPD–L1的抑制信号可通过磷酸化SHP–1、SHP–2发挥作用，PD–L1阻断型抗体2H11可通过抑制p–SHP–1的表达部分恢复T淋巴细胞的增殖能力。