【摘 要】
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目的:探索类固醇分泌功能的肾上腺皮质三维培养体系.方法:选取2019—2021年于广西医科大学第二附属医院的流产胚胎肾上腺组织,消化成细胞悬液,基质胶包裹三维培养.培养基中添加FGF2生长因子,Wnt信号通路激活因子(CHIR99021、R-spondin1),通过病理组织染色、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫荧光和透射电镜等方法检测相关基因及蛋白表达水平,并分析其对于类固醇分泌功能培养体系建成的影响.结果:(1)添加FGF2生长因子后,3D培养球体直径明显增加.(2)添加CHIR9
【机 构】
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广西医科大学基因组与个体化医学研究中心,南宁 530021;广西医科大学再生医学与医用生物资源开发应用协同创新中心,南宁 530021;广西医科大学基因组与个体化医学研究中心,南宁 530021;广西
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目的:探索类固醇分泌功能的肾上腺皮质三维培养体系.方法:选取2019—2021年于广西医科大学第二附属医院的流产胚胎肾上腺组织,消化成细胞悬液,基质胶包裹三维培养.培养基中添加FGF2生长因子,Wnt信号通路激活因子(CHIR99021、R-spondin1),通过病理组织染色、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫荧光和透射电镜等方法检测相关基因及蛋白表达水平,并分析其对于类固醇分泌功能培养体系建成的影响.结果:(1)添加FGF2生长因子后,3D培养球体直径明显增加.(2)添加CHIR99021、R-spondin1后,球状体具有显著外层致密内层疏松的肾上腺特殊结构,更有利3D培养肾上腺立体结构的形成;(3)RT-qPCR显示3D培养形成的球状类器官结构表达SF-1、CYP17A1、CYP11A1、CYP11B1、HSD3B2类固醇合成关键酶表达,免疫荧光染色证实了CYP17A1蛋白在类器官球状结构的表达.(4)球体结构的类器官表达黑皮质素2受体(MC2R)受体,在受促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激下,皮质醇分泌增加.结论:添加FGF2、Wnt信号通路激活因子CHIR99021、R-spondin1,可建立一种具有类固醇激素分泌功能且受促肾上腺皮质激素调控的肾上腺皮质三维培养体系.
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