【摘 要】
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目的 构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞 (DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库 ,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑
【机 构】
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第三军医大学第一附属医院皮肤科; 第三军医大学第一附属医院皮肤科 400038重庆; 400038重庆; 4000;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目 (3 0 0 70 3 75 )
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目的 构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞 (DPC)差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库 ,为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法 应用抑制性消减杂交技术 ,分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA ;依次合成单链及双链cDNA ,分别与 2种不同的接头连接 ,再进行正向和反向的 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ;将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库。结果 构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,文库扩增后得到 12 0个阳性克隆 ,其中 90个克隆含有 10 0～ 5 0 0bp插入片段。结论 应用抑制性消减杂交技术所构建的斑秃区及正常头皮DPCcDNA消减文库 ,为进一步批量筛选、克隆斑秃区及正常头皮DPC特异性表达的基因奠定了基础。
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