【摘 要】
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从福建省永泰县温泉采集样品中筛选到1株产耐热木聚糖酶嗜热菌株TC-W7,并获得该木聚糖酶基因。在此基础上,采用易错PCR技术在木聚糖酶基因中引入突变,研究Mg2+浓度、Mn2+浓度
【机 构】
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福建农林大学食品科学学院,国家菌草工程技术研究中心,福建农林大学生物能源研究所,福建农林大学生物能源研究所,福建农林大学食品科学学院,福建农林大学生物能源研究所,国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资
【基金项目】
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国家自然科学基金(41306181,31370146),中国博士后科学基金(2013M530303),福建省教育厅科技项目(JB12055),三亚市院地科技合作项目(2013YD76),国家海洋局海洋生物遗传重点实验室开放研究基金(HY201301),福建农林大学青年教师科研基金重点项目(2012XJJ03)
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从福建省永泰县温泉采集样品中筛选到1株产耐热木聚糖酶嗜热菌株TC-W7,并获得该木聚糖酶基因。在此基础上,采用易错PCR技术在木聚糖酶基因中引入突变,研究Mg2+浓度、Mn2+浓度、dTTP/dCTP浓度等条件对突变率的影响。通过形态特征、生理生化试验及16S rRNA序列相似性比对分析,初步鉴定菌株TC-W7为土壤芽胞杆菌(Geobacillus),菌株TC-W7在最适温度75℃和pH 8.2条件下,其木聚糖酶活力为215.83 U/mL,Triton X-100和DDT能显著增强该酶的活性。在Mg2+浓度为20μmol/L,Mn2+浓度为0.80μmol/L,dTTP/dCTP浓度为0.30 mmol/L的致突变条件下,碱基突变率为0.98%。Geobacillus sp.TC-W7产木聚糖酶具有较好的耐热和耐碱等工业应用特性,对该酶易错PCR致突变条件优化结果,可用于后续木聚糖酶的耐热定向进化。
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