人血管内皮细胞生长因子受体2小干扰RNA的设计及其表达载体的构建

来源 :中华妇幼临床医学杂志电子版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiwen1982
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目的

寻找并探讨干扰效果强的人血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelialgrowth factor receptor 2,VEGFR-2)小干扰RNA (small interference RNA, siRNA),以抑制白血病细胞。

方法

设计人VEGFR-2 siRNA,并转染HL60细胞,MTT法筛选最有效siRNA;合成VEGFR-2shRNA,并构建VEGFR-2 shRNA表达载体;比较VEGFR-2 shRNA表达载体转染HL60细胞后干扰的效果。

结果

筛选出最有效siRNA; VEGFR-2 shRNA正确正向克隆入pENTR TM/U6,成功构建VEGFR-2 shRNA表达载体;以其将VEGFR-2 shRNA瞬时转染入HL60细胞后,细胞生长抑制率为84.9%,P<0.01;VEGFR-2蛋白表达明显减少。

结论

通过必要和有效的筛选机制,才能找到抑制效果相对高的siRNA靶序列;VEGFR-2 shRNA表达载体可在细胞内简单、快速地克隆shRNA,VEGFR-2的表达抑制率高。

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