新金色分枝杆菌ksdD基因的敲除及其对菌株AD(D)合成的影响

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新金色分枝杆菌(Mycobacteriumneoaurum)能将植物甾醇转化为药物中间体4-烯-雄甾-3,17-二酮(AD)和1,4-二烯-雄甾-3,17-二酮(ADD),其中3-甾酮-△1-脱氢酶(KSDD)是AD转化为ADD的关键酶。本实验室在筛菌过程中筛选到-株能将甾醇转化为AD(D)的菌株,经鉴定为M.neoaurum,本研究以该菌株为出发菌株,首先扩增出长度约1.7kb编码KSDD的ksdD基因全序列,在基因内部插入-段来源于质粒pET28a的卡那霉素抗性基因(Km),将得到的基因元件ksdD:
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