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目的
探讨在人骨肉瘤细胞中沉默隐花色素基因1(CRY1)的作用及其机制。
方法将靶向CRY1基因的携带短发夹RNA(shRNA)表达的质粒通过慢病毒载体转入人骨肉瘤细胞株(HOS)，以沉默人骨肉瘤细胞中CRY1基因。应用Western blot检测HOS细胞中CRY1基因的敲低效果；应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验明确CRY1基因敲低对骨肉瘤细胞生长的影响；应用Western blot技术检测CRY1下游基因的表达变化；应用实时荧光定量聚合酶链反应检测关键生物钟基因CRY1、隐花色素基因2(CRY2)、Period基因(PER1、PER2)、BMAL1、CLOCK mRNA的表达水平。
结果CRY1沉默组(0.839±0.020)较对照组(0.553±0.019)生长加快(P<0.01)，并且经典Wnt通路抑制分子糖原合成酶-3β(Gsk-3β)的磷酸化水平沉默组(1.105±0.052)较对照组(0.449±0.061)升高而导致其降解增加(P<0.01)，关键分子β-连环蛋白(β-catenin)的核内水平对照组(0.729±0.067)较沉默组(1.119±0.018)升高(P<0.01)；同时，HOS细胞中除CRY1基因的mRNA水平降低外，其余生物钟基因mRNA水平均升高；此外，挽救实验中HOS细胞生长受抑制(对照组：1.012±0.151，沉默组：1.483±0.095，过表达组：0.541±0.129，P<0.01)。
结论隐花色素基因CRY1能通过经典Wnt通路抑制骨肉瘤细胞的生长，并能影响生物钟网络关键基因CRY2、PER1、PER2、BMAL1、CLOCK的表达，提示该基因在骨肉瘤细胞中具有重要的调控作用。