【摘 要】
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为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC
【机 构】
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河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室,华中农业大学教育部动物遗传育种与繁殖重点实验室,河南省现代畜牧业协同创新中心
【基金项目】
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农业部“引进国际先进农业科学技术”（948）重点项目（2011-G35）, 国家转基因重大专项（2014ZX0801015B）, 郑州市科技攻关项目（141PPTGG430）
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为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点
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