【摘 要】
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目的:探讨lncRNA A_30_P01029806对脓毒症急性肺损伤的影响及作用机制.方法:采用内毒素(LPS)处理体外培养的小鼠肺上皮细胞(MLE-12),实验分为对照组(Ctrl组)、LPS处理组(LPS组)、敲低A_30_P01029806组(LPS+si-A30P组)和转染对照组(LPS+si-NC组).实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中A_30_P01029806的表达量,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(
【机 构】
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海南医学院第一附属医院急诊科,海南海口 570102
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目的:探讨lncRNA A_30_P01029806对脓毒症急性肺损伤的影响及作用机制.方法:采用内毒素(LPS)处理体外培养的小鼠肺上皮细胞(MLE-12),实验分为对照组(Ctrl组)、LPS处理组(LPS组)、敲低A_30_P01029806组(LPS+si-A30P组)和转染对照组(LPS+si-NC组).实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞中A_30_P01029806的表达量,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白质印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中关键蛋白表达量.在LPS+si-A30P组细胞中添加NF-KB信号通路特异性抑制剂BAY11-7082,采用同样的方法分析BAY11-7082对细胞活力、凋亡以及TNF-α和IL-6表达的影响.将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、敲低A_30_P01029806组(si-A30P组)和siRNA对照组(si-NC组),各组于造模24 h后取肺组织,进行肺损伤半定量评分(IQA),计算肺湿/干重比(W/D),采用ELISA检测肺组织中TNF-α和IL-6的含量.结果:与Ctrl组比,LPS组细胞活力明显降低,细胞中A_30_P01029806的表达量、凋亡率、IκBα和p65磷酸化水平明显升高,TNF-α和IL-6含量明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);与LPS组比,LPS+si-A30P组上述各指标均得到明显逆转,差异均有统计学意义(P＜0.05);LPS组与LPS+si-NC组上述各指标间差异无统计学意义(P＞0.05).BAY11-7082能够部分逆转敲低A_30_P01029806对细胞活力提高、凋亡以及炎症因子分泌的抑制作用.与Sham组比,CLP组小鼠肺损伤评分、W/D值及肺组织中TNF-α和IL-6的含量均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与CLP组比,si-A30P组肺损伤评分、W/D值、TNF-α和IL-6含量均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);CLP组与si-NC组上述各指标间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:敲低A_30_P01029806能够减轻脓毒症急性肺损伤,其作用机制可能与阻断NF-κB信号通路抑制炎症反应有关.
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