【摘 要】
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目的 探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系.方法 2018年5月至2019年12月,建立H/R H9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组.用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/R H9C2细胞.实时
【机 构】
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中国人民解放军联勤保障部队第988医院心胸外科,河南 焦作454003;武汉亚洲心脏病医院心脏外科,湖北 武汉430000
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目的 探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系.方法 2018年5月至2019年12月,建立H/R H9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组.用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/R H9C2细胞.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中miR-138-5p、KLHDC10、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性.结果 H/R组于对照组,H/R H9C2细胞中miR-138-5p的表达水平明显降低[(0.34±0.03)比(1.00±0.11)],KLHDC10的表达水平明显升高,细胞存活率显著降低[(62.03±6.20)％比(100.04±10.05)％],凋亡率显著升高[(28.16±2.82)％比(7.22±0.72)％],同时下调cyclin D1、上调cleaved-caspase-3的蛋白水平(P<0.05).过表达miR-138-5p、抑制KLHDC10可明显促进H/R H9C2细胞存活,抑制凋亡,上调cyclin D1、下调cleaved-caspase-3的蛋白水平.miR-138-5p明显抑制野生型KLHDC10的H9C2细胞荧光素酶活性,并负向调控H9C2细胞中KLHDC10蛋白水平;过表达KLHDC10可逆转miR-138-5p对H/R H9C2细胞的存活和凋亡的调控作用.结论 miR-138-5p可促进H/R H9C2细胞的存活,抑制凋亡,其机制之一为靶向下调KLHDC10.
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