【摘 要】
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目的:建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用.方法:RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855 bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-
【机 构】
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河北医科大学实验动物学部、河北省实验动物实验室,石家庄050017河北医科大学第三医院检验科,石家庄050051
【出 处】
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2013‘第十一届中国北方实验动物科技年会
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目的:建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用.方法:RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855 bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-hBAFF,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达.重组载体经显微注射斑马鱼受精卵后,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼.qPCR法检测早期免疫相关基因表达情况.结果:人BAFF-GFP融合蛋白可成功表达,利用Tol2-hBAFF重组质粒显微注射斑马鱼受精卵可获得表达人BAFF的转基因斑马鱼,且表达人BAFF斑马鱼1 dpf胚胎中TCRAC明显高表达,而Ikaros则表达量显著降低,表明在斑马鱼胚胎中表达人BAFF蛋白会造成早期淋巴系统中基因的过早表达.结论:研究所建立的表达人BAFF的转基因斑马鱼可为系统性红斑狼疮等,与BAFF功能亢进密切相关的自身免疫性疾病的治疗及相关机制研究,提供一种具有诸多优点的新型工具.
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