SARS-3CL蛋白酶基因在杆状病毒载体中的构建及其转染

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目的:构建SARS冠状病毒3CL蛋白酶基因的杆状病毒重组供体质粒,包装重组3CL蛋白酶的杆状病毒,感染昆虫细胞进行表达。方法:首先扩增含3cl—Teasy和pFastBac HTb的转化菌,用酶切连接法构建重组转座质粒pFBHTb-3cl。将该质粒转化E.coli DH10Bac感受态菌,在菌体内进行重组,并经三重抗性和蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid—HTb-3cl,对重组质粒Bacmid—HTB-3cl进行纯化并转染Sf9昆虫细胞包装杆状病毒,利用病毒感染Sf9昆虫细胞并进行蛋白表达。利用
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