目的 分析EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)B淋巴细胞表位的免疫原性.方法 利用生物信息学技术筛选出EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391,将其相应基因片段分别克隆至pET32a(+)载体并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹分析鉴定,通过Ni-NTA离子螯合亲和层析柱纯化.分别以纯化的表位蛋白作为免疫原,皮下多点注射BALB/c小鼠,设pET32a(+)蛋白和PBS为对照.分别以3个表位蛋白作包被抗原,ELISA法检测第0、3、6周小鼠血清中相应表位特异性抗体IgG,并于免疫后第6周检测各免疫组小鼠血清抗体识别天然EBV抗原的能力.结果 在原核表达体系中分别获得了表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381 391融合表达产物.纯化的表位蛋白免疫小鼠,血清中分别能检测到相应的表位特异性抗体IgG,其抗体水平随着免疫次数的增加而呈现逐渐升高的趋势,表位LMP2318-322免疫组第3、6周小鼠血清抗体显著高于pET32a(+)蛋白对照组(F=493.85、773.99,均P＜0.05),LMP2381 391免疫组第3、6周抗体水平亦显著高于pET32a(+)蛋白对照组(F=926.33、309.14,均P＜0.05),而表位LMP2199 209免疫组至第6周特异性抗体高于pET32a(+)蛋白对照组(F=87.27,P＜0.05).3个表位蛋白免疫小鼠血清抗体IgG均能识别EBV天然抗原,以表位LMP2199-209和LMP2381-391免疫组抗EBV-IgG生成水平尤为显著.结论 筛选的EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391通过原核表达体系中制备的表位蛋白,具有较好的免疫原性,可进一步用于EBV感染及其相关肿瘤表位疫苗的研究。
EB病毒潜伏膜蛋白2的B细胞表位免疫原性研究
【摘 要】
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目的 分析EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)B淋巴细胞表位的免疫原性.方法 利用生物信息学技术筛选出EBV LMP2可能的优势B淋巴细胞表位LMP2199-209、LMP2318-322和LMP2381-391,将其相应基因片段分别克隆至pET32a(+)载体并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)菌株诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹分析
【机 构】
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325032,温州医学院微生物学与免疫学教研室,325032,温州医学院微生物学与免疫学教研室,郧阳医学院微生物学教研室,325032,温州医学院微生物学与免疫学教研室,325032,温州医学院微生物
【出 处】
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中华传染病杂志
【发表日期】
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2010年28期
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