上皮－间质转化(EMT)是导致后囊膜混浊(PCO)的主要发病机制之一，研究LECs的EMT过程对PCO的防治具有重要意义，但目前缺乏研究EMT的PCO体外细胞模型。
目的建立新的人晶状体囊外摘出术PCO的体外囊袋培养模型，探讨PCO形成过程中LECs EMT的发生情况。
方法利用健康供体的40只尸眼行体外模拟的白内障摘出术，游离晶状体囊袋后用昆虫针固定于培养皿，置于含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养液中培养4周，分别于培养后0、3、7、14和28 d在光学显微镜下观察培养囊袋中LECs的生长情况；收集0、3、7和28 d的囊袋组织制备组织病理学切片，采用苏木精－伊红染色法检测囊袋上LECs的细胞形态；采用免疫组织化学染色法检测EMT标志物α-SMA、E-cadherin和Vimentin蛋白在囊袋上LECs中的表达和定位；采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测不同时间点囊袋上LECs中α-SMA、E-cadherin和Vimentin mRNA及其蛋白的表达变化。
结果未进行培养的囊袋后囊膜上未发现LECs生长，囊袋培养后3 d可见后囊膜周边出现LECs并逐渐向中央区增生，培养后7 d LECs完全覆盖后囊膜，略呈铺路石样外观并出现皱褶，此后随着培养时间的延长皱褶的数量增多并伸长，囊袋张力增强。免疫组织化学染色结果显示，随培养时间的延长，囊袋上LECs中E-cadherin的表达强度逐渐下降，而α-SMA和Vimentin的表达强度逐渐增强。实时荧光定量PCR检测表明，培养后0、3、7、14和28 d囊袋上LECs中E-cadherin mRNA的相对表达量分别为3.35±0.13、1.47±0.20、1.13±0.14、1.00±0.85和0.23±0.03，Vimentin mRNA的相对表达量分别为1.00±0.73、1.05±0.14、2.24±0.43、2.84±0.34和8.570±0.40，α-SMA mRNA的相对表达量分别为1.00±0.06、2.68±0.28、4.24±0.05、2.05±0.90和15.30±0.19，总体比较差异均有统计学意义(E-cadherin mRNA：F＝23.430，P＝0.000；Vimentin mRNA：F＝8.915，P＝0.002；α-SMA mRNA：F＝103.500，P＝0.000)，其中培养后28 d囊袋上LECs中E-cadherin mRNA的相对表达量最低，而Vimentin mRNA和α-SMA mRNA的相对表达量均最高，差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot检测结果表明，培养后0、3和28 d囊袋上LECs中E-cadherhin蛋白表达的灰度值分别为1.443±0.017、1.023±0.003和0.568±0.018，Vimentin蛋白表达的灰度值分别为0.565±0.012，1.156±0.007和1.241±0.009，α-SMA蛋白表达的灰度值分别为0.195±0.045，0.693±0.036和1.501±0.005，总体比较差异均有统计学意义(E-cadherhin：F＝2 787.000，P＝0.000；Vimentin：F＝4 488.000，P＝0.000；α-SMA：F＝1 173.000，P＝0.000)，其中培养后3、28 d LECs中E-cadherhin蛋白表达明显低于0 d，而Vimentin和α-SMA蛋白表达明显高于0 d，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论本研究中的新囊袋模型进行LECs体外培养能模拟体内白内障术后晶状体后囊LECs的EMT自然过程，是探讨PCO发生机制和方法新的体外细胞模型。