【摘 要】
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目的:筛选和鉴定肿瘤血管靶向肽GX1(CGNSNPKSC)的结合受体。方法:化学合成生物素标记的GX1,培养内皮细胞并收集细胞膜蛋白;利用免疫沉淀的方法进行免疫磁珠分离,富集能与血管
【机 构】
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第四军医大学西京医院消化病研究所,肿瘤生物学国家重点实验室,
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目的:筛选和鉴定肿瘤血管靶向肽GX1(CGNSNPKSC)的结合受体。方法:化学合成生物素标记的GX1,培养内皮细胞并收集细胞膜蛋白;利用免疫沉淀的方法进行免疫磁珠分离,富集能与血管特异性短肽GX1结合的蛋白质;利用生物素-亲和素系统进行western blot免疫检测,筛选出能和GX1结合的目的条带;利用液相色谱-二级质谱(LC-MS/MS)对能与血管特异性短肽GX1结合的蛋白质进行测序鉴定。结果:利用免疫沉淀和western blot的方法,获得了能与GX1结合的蛋白条带,其分子量为13KDa。利用LC-MS/MS及生物信息学分析,获得了8个候选蛋白:cDNA FLJ40018fis,clone STOMA2006398,cytochromeP45019A1,probable histone-lysine N-methyltransferaseASH1L,adenylyl cyclase-associated protein2(CAP2),similar toankyrin repeat domain20A,diacylglycerol kinase iota(DGKI),isoform2of Inositol1,4,5-trisphosphate receptortype1,similar to annexinA2isoform1。结论:利用免疫沉淀-质谱法获得了8个GX1结合受体的候选蛋白,为进一步寻找血管抑制治疗的靶标奠定了一定的实验基础。
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