【摘 要】
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目的 构建过表达HLA-G5的慢病毒载体,感染人羊膜间充质干细胞(human amnion drived mesenchymal stem cells,hAD-MSCs),为后续探索HLA-G5在hAD-MSCs诱导免疫耐受中的作用和机
【机 构】
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遵义医学院附属医院生殖医学中心,贵州遵义,563099遵义医学院附属医院急诊科,贵州遵义,563099;遵义医学院附属医院体检中心,贵州遵义,563099;
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目的 构建过表达HLA-G5的慢病毒载体,感染人羊膜间充质干细胞(human amnion drived mesenchymal stem cells,hAD-MSCs),为后续探索HLA-G5在hAD-MSCs诱导免疫耐受中的作用和机制,并为探索以其作为生物反应器生产HLA-G5提供前期实验基础.方法 人工合成HLA-G5全长序列,定向接人真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,转化入大肠杆菌,酶切鉴定和测序正确后进行慢病毒包装.按照慢病毒滴度梯度感染hAD-MSCs,DAPI复染细胞核,荧光显微镜下观察感染效率.MTS检测连续感染24 h后慢病毒对hAD-MSCs的毒性.ELISA法检测感染后细胞上清中的可溶性HLA-G5表达.结果 ①酶切鉴定和测序结果显示,HLA-G5表达质粒质量合格,序列比对与设计序列符合率100％;②感染hAD-MSCs后有较高的感染效率(接近100％);③构建的慢病毒毒性较小;④感染后hAD-MSCs分泌可溶性HLA-G5增高.结论 本研究中构建的HLA-G5慢病毒过表达载体能够安全高效的感染hAD-MSCs,为进一步研究其体内外诱导免疫耐受的作用和机制,并将其作为细胞反应器生产HLA-G5的前期工艺奠定了基础.
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