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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定通脉刺五加胶囊中金丝桃苷的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相，检测波长为360nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。金丝桃苷在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。金丝桃苷平均回收率分别为99.6%。结论：本法简便、准确，可用于通脉刺五加胶囊中金丝桃苷的含量测定。
关键词：通脉刺五加胶囊；含量；测定
通脉刺五加胶囊为胶囊剂，内容物为黄褐色至棕褐色的颗镣粉末；味苦、微涩。通脉刺五加胶囊用于瘀血闭阻所致的胸痹心病，症见胸痛，胸闷，心悸等。刺五加在中国医药学中做为药物广泛应用已有悠久的历史，具有“补中益精、坚筋骨、强志意”的作用。《别录》记载：“疗男子阴痿，囊下湿，小便余沥，女人阴痒及腰脊痛，两脚疼痹风弱，五缓虚羸，补中益精，坚筋骨，强志意。”金丝桃苷又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，由槲皮素的3位O原子以β糖苷键与糖基相连。金丝桃苷具有抗炎、降压、抗抑郁、增强免疫、降低胆固醇、蛋白同化、解痉、利尿、止咳、局部和中枢镇疼等多种生理活性[1-6]。本文采用高效液相法对通脉刺五加胶囊中的金丝桃苷的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；YL9100液相色谱仪（汕头市科毅仪器设备有限公司）；长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；新芝scientz-T超声波提取机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：金丝桃苷
1.4 试剂：醋酸钠（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、四氢呋喃（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、磷酸二氢铵（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、冰醋酸（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、甲醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、乙腈（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）。
1.5 试药：通脉刺五加胶囊
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相，检测波长：360nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按金丝桃苷峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制備
取在60℃减压干燥4小时的金丝桃苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量，精密称定，加60毫升70%甲醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%甲醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70%甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。
2.4 精密度试验
精密称取金丝桃苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量金丝桃苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，金丝桃苷在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的金丝桃苷样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.87%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入金丝桃苷对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“ 含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.88%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定通脉刺五加胶囊三批样品。
3 讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（2：2：30：80），乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于通脉刺五加胶囊中金丝桃苷的含量测定。
参考文献
[1]任毅，李平华，陈潇.金丝桃苷通过上调Caspase-3、NF-κB表达抑制眼睑麟状癌细胞增殖和转移的影响[J].中药药理与临床，2017（01）.
[2]王丽敏，李爽，张明远，朱秋双，佟关峰.金丝桃苷对人结肠癌HCT8细胞生长周期、细胞凋亡及对Caspase蛋白活性的影响[J].时珍国医国药， 2012（12）.
[3]李莹，周燏，孙蕾清，周忠海，吕小婷，徐明，李昳，刘军权.金丝桃苷增强人γδT细胞增殖及杀伤功能研究[J].中国免疫学杂志，2016（04）.
[4]王丽敏，江清林，毕士有，史伟国，赵锦程，张明远.金丝桃苷对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用研究[J].黑龙江医药科学，2010（01）.
[5]王丽敏，杨玉，张明远，卢春凤，朱秋双.金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用[J].中国实验方剂学杂志，2016（22）.
[6]高健美，牛爽，李柯，李德芬，陈娜娜，李海波.金丝桃苷对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用[J].中药药理与临床，2017（01）.
关键词：通脉刺五加胶囊；含量；测定
通脉刺五加胶囊为胶囊剂，内容物为黄褐色至棕褐色的颗镣粉末；味苦、微涩。通脉刺五加胶囊用于瘀血闭阻所致的胸痹心病，症见胸痛，胸闷，心悸等。刺五加在中国医药学中做为药物广泛应用已有悠久的历史，具有“补中益精、坚筋骨、强志意”的作用。《别录》记载：“疗男子阴痿，囊下湿，小便余沥，女人阴痒及腰脊痛，两脚疼痹风弱，五缓虚羸，补中益精，坚筋骨，强志意。”金丝桃苷又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，由槲皮素的3位O原子以β糖苷键与糖基相连。金丝桃苷具有抗炎、降压、抗抑郁、增强免疫、降低胆固醇、蛋白同化、解痉、利尿、止咳、局部和中枢镇疼等多种生理活性[1-6]。本文采用高效液相法对通脉刺五加胶囊中的金丝桃苷的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；YL9100液相色谱仪（汕头市科毅仪器设备有限公司）；长城狮鼎SHB-III型台式循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；新芝scientz-T超声波提取机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：金丝桃苷
1.4 试剂：醋酸钠（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、四氢呋喃（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、磷酸二氢铵（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、冰醋酸（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、甲醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、乙腈（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）。
1.5 试药：通脉刺五加胶囊
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相，检测波长：360nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按金丝桃苷峰计算应不得低于2500。
2.2 对照品溶液的制備
取在60℃减压干燥4小时的金丝桃苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每lml含20μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量，精密称定，加60毫升70%甲醇溶液超声处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%甲醇溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加70%甲醇溶液至刻度，摇匀，即得。
2.4 精密度试验
精密称取金丝桃苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为20μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量金丝桃苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，金丝桃苷在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的金丝桃苷样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.87%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入金丝桃苷对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“ 含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.6%，RSD为0.88%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定通脉刺五加胶囊三批样品。
3 讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（2：2：30：80），乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于通脉刺五加胶囊中金丝桃苷的含量测定。
参考文献
[1]任毅，李平华，陈潇.金丝桃苷通过上调Caspase-3、NF-κB表达抑制眼睑麟状癌细胞增殖和转移的影响[J].中药药理与临床，2017（01）.
[2]王丽敏，李爽，张明远，朱秋双，佟关峰.金丝桃苷对人结肠癌HCT8细胞生长周期、细胞凋亡及对Caspase蛋白活性的影响[J].时珍国医国药， 2012（12）.
[3]李莹，周燏，孙蕾清，周忠海，吕小婷，徐明，李昳，刘军权.金丝桃苷增强人γδT细胞增殖及杀伤功能研究[J].中国免疫学杂志，2016（04）.
[4]王丽敏，江清林，毕士有，史伟国，赵锦程，张明远.金丝桃苷对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用研究[J].黑龙江医药科学，2010（01）.
[5]王丽敏，杨玉，张明远，卢春凤，朱秋双.金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用[J].中国实验方剂学杂志，2016（22）.
[6]高健美，牛爽，李柯，李德芬，陈娜娜，李海波.金丝桃苷对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老作用[J].中药药理与临床，2017（01）.