【摘 要】
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目的 构建人琥珀酸受体1(SUCNR1)基因启动子荧光素酶报告基因重组表达载体并检测其活性.方法 以糖尿病患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR),经分子克隆法将SUCNR1基因启动子序列插入pGL3-Basic质粒,用菌落PCR、测序方法筛选和鉴定重组质粒.实验组-1,-2,-3组为分别转入pRL-TK质粒和不同序列的重组质粒(SNP1、SNP2、SNP3)的293T细胞,测定各组的荧光素酶活性(重组质粒荧光素酶活性与海肾素荧光素酶活性的比值),间接检测不同启动子序列的差异表达.结果 PCR反应
【机 构】
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齐齐哈尔医学院 医药科学研究院, 黑龙江齐齐哈尔161006
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目的 构建人琥珀酸受体1(SUCNR1)基因启动子荧光素酶报告基因重组表达载体并检测其活性.方法 以糖尿病患者基因组DNA为模板进行聚合酶链反应(PCR),经分子克隆法将SUCNR1基因启动子序列插入pGL3-Basic质粒,用菌落PCR、测序方法筛选和鉴定重组质粒.实验组-1,-2,-3组为分别转入pRL-TK质粒和不同序列的重组质粒(SNP1、SNP2、SNP3)的293T细胞,测定各组的荧光素酶活性(重组质粒荧光素酶活性与海肾素荧光素酶活性的比值),间接检测不同启动子序列的差异表达.结果 PCR反应和菌落PCR反应获得产物长度均为1065 bp;重构载体插入序列与数据库中标准序列匹配度为99.36％;对照组和实验组-1,-2,-3组的相对荧光素酶活性分别为2.33±0.55,19.34±3.51,37.56±4.73和23.67±2.52.各实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 成功构建人pGL3-Basic-SUCNR1荧光素酶表达载体,且糖尿病患者中带有不同SNP位点的SUCNR1基因启动子活性存在显著差异.
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