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为高效获得内生真菌U29、U32、U50、U51石杉碱甲生产菌株的原生质体和为原生质体融合及基因组改组选育高产石杉碱甲菌株提供参考，研究了溶解酶的浓度、加酶量、酶解温度、稳定剂等因子对4株菌原生质体制备的影响。通过研究获得了菌株原生质体制备的优化条件：溶壁酶浓度为3．0％、加酶量为2．0 mL／100 mg、菌龄为5 d、酶解时间为2．5 h、酶解温度为30℃、0．6 mol／mL 氯化钠为稳定剂、CYM培养基为再生培养基。在此优化条件下，4株菌的原生质体的产量均大于7．0×107个／mL，再生率可达20％以上。