【摘 要】
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目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus G protein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原.方法:根据Gen
【机 构】
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南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,病理学系,江苏南京,210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,生物技术系,江苏南京,210029;南京医科大学第二附属医院消化内科,江苏南京,21001
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目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus G protein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原.方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG.阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件.利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定.结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白.Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性.结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原.
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