【摘 要】
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目的研究抗菌肽MSI-78基因的克隆及鉴定方法,为抗菌肽MSI-78基因的表达及抗菌活性研究奠定基础。方法根据MSI-78氨基酸序列及大肠埃希菌(ECO)偏爱密码子,推出MSI-78编码基因,
【机 构】
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兰州大学第二医院检验科; 兰州大学基础医学院;
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目的研究抗菌肽MSI-78基因的克隆及鉴定方法,为抗菌肽MSI-78基因的表达及抗菌活性研究奠定基础。方法根据MSI-78氨基酸序列及大肠埃希菌(ECO)偏爱密码子,推出MSI-78编码基因,化学合成获得MSI-78基因,ECORⅠ和PstⅠ消化后与pUC18载体连接并转化大肠埃希菌DH5α,α-互补筛选阳性重组菌,单酶切、双酶切、PCR鉴定阳性重组体。结果通过ECORⅠ单酶切、ECORⅠ和PstⅠ双酶切抽提的阳性重组质粒,证实阳性重组质粒中含有抗菌肽MSI-78基因,特异性引物PCR扩增也证实阳性重组质粒中含有抗菌肽MSI-78基因,说明MSI-78基因成功在大肠埃希菌DH5α克隆。结论MSI-78基因的克隆为后期的表达、纯化及生物活性研究奠定了基础。
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