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目的:建立和验证测定人血清中利妥昔单抗和生物类似物的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法,用于生物类似药的药动学评估.方法:在96孔板中包被rat anti Rituximab (MCA2260)以捕获人血清中的抗CD20人鼠嵌合单抗(TQB2303)或者利妥昔单抗,加入生物素标记MCA2260与被捕获TQB2303或者利妥昔单抗结合,以链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂.从选择性、特异性、精密度和准确度、稀释线性、钩状效应和平行性等方面分别验证了本方法在定量分析人血清中利妥昔单抗和TQB2303浓度时的可靠性.结果:本方法检测利妥昔单抗和TQB2303的灵敏度为19.53 ng·mL-1;用2个待测物5个浓度水平验证样品的数据,统计计算方法的批间精密度和准确度分别在10.1％～22.4％和1.8％ ～6.1％范围内;方法的选择性、特异性和2 ～2 000倍稀释范围内稀释线性均符合指导原则的要求;方法在1 000.00 ～1 000 000.00ng·mL-1浓度范围内无钩状效应,受试药物TQB2303的稳定性可以支持从样品采集到样品测定的整个过程.此外本实验用真实样品考察了方法的平行性,平行性结果显示本方法不存在真实样品稀释非线性的情况.结论:成功建立并验证了能够测定人血清中利妥昔单抗和TQB2303浓度的ELISA方法,满足生物类似药的药动学评估和申报需要.