探讨Oct4B1基因过表达是否增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性及其机制,以及与诱导细胞上皮-间充质转化(EMT)过程的关系。
方法实验分组:将SW620细胞随机平均分为实验组及对照组、实验组(SW620-Oct4B1):转染带G418抗性的Oct4B1过表达质粒;对照组(SW620-NC):转染带G418抗性的阴性对照质粒;筛选合适浓度G418建立稳定转染细胞株。对稳定转染两组细胞作如下检测:(1)噻唑蓝(MTT)法检测细胞对不同浓度奥沙利铂的敏感性;(2)Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)及EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达;(3)划痕实验检测12、24 h迁移能力;(4)Transwell小室检测24 h时侵袭能力。
结果实验组与对照组比较:(1)对奥沙利铂敏感性实验组明显低于对照组(t=8.889、5.427、9.678、4.459、5.362,P=0.001、0.006、0.001、0.011、0.006);(2)P-gp表达两组分别为0.401、0.439、0.419(0.420±0.020)及0.099、0.110、0.120(0.110±0.010),实验组明显高于对照组(t=24.723,P=0.000);(3)12 h伤痕愈合率分别为32.196%、32.382%、33.441%(32.670±0.670)%及23.049%、25.286%、23.674%(24.000±1.150)%,实验组明显高于对照组(t=11.245,P=0.001);24 h伤痕愈合率分别为67.048%、68.650%、66.291%(67.330±1.200)%和49.161%、47.632%、53.203%(50.000±2.880)%。实验组显著高于对照组(t=9.620,P=0.001);(4)24 h两组透膜细胞数分别为400.105、407.500、384.300(397.300±11.850)个及205.641、186.244、215.02(202.300±14.680)个,实验组显著多于对照组(t=17.905,P=0.000);(5)E-cadherin表达两组分别为0.186、0.190、0.223(0.200±0.020)及0.530、0.531、0.529(0.530±0.010),实验组明显低于对照组(t=28.143,P=0.000),而N-cadherin表达两组分别为0.949、0.935、0.906(0.930±0.020)及0.687、0.648、0.675(0.670±0.020),实验组显著高于对照组(t=15.181,P=0.000)。
结论Oct4B1基因过表达能增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性,其机制可能与诱导细胞EMT过程有关。