【摘 要】
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为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线。首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,甘肃省科学院生物研究所厌氧微生物中心,北京市畜牧总站
【基金项目】
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甘肃农业大学2019年学生科研训练计划(SRTP,201903046),甘肃农业大学盛彤笙基金(GSAU-STS-1522),甘肃省科技计划项目重点研发计划(18YF1NA077),甘肃农业大学动物医学院教研产学支持项目(JYCX-KX004)
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为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线。首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接到pMD18-T载体上,并转化进入大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经测序鉴定成功后,提取重组质粒并以10倍系列稀释后作为标准模板,进行实时荧光定量PCR。成功建立了牛源粪肠球菌esp基因荧光定量PCR标准曲线及其直线回归方程,所得熔解曲线峰值单一,表明引物具有很好的特异性;标准曲线相关系数r^2=0.9998,说明线性关系良好,
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