【摘 要】
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RSSG58是利用抑制差减杂交技术从水稻精细胞文库中筛选到的在精细胞中优势表达的基因,推测其编码的蛋白质与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性(46%),并具有肌球蛋白特色的
【机 构】
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四川大学生命科学学院,河南大学生命科学学院
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RSSG58是利用抑制差减杂交技术从水稻精细胞文库中筛选到的在精细胞中优势表达的基因,推测其编码的蛋白质与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性(46%),并具有肌球蛋白特色的结构域.把RSSG58基因开放编码框连接到表达载体pQE30上,重组质粒在E.coli M15中表达出N端融合了6×His的融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,表达产物的分子量约为66 kD,其表达量占菌体总蛋白的8.6%.分离纯化融合蛋白来免疫家兔,制得了高效价、高特异性的多克隆抗体.Western 杂交显示,在分离的精细胞内该基因编码的蛋白表达量很高,而成熟花粉和二细胞中只有微弱表达,单细胞花粉、花粉母细胞没有杂交信号,表明RSSG58基因在精细胞中优势表达.
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