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以经产荷斯坦奶牛的乳腺组织为材料，抽提总的RNA，分离提纯Poly（A）^＋RNA，反转录并合成单链和双链的eDNA，经酶切形成200800bp的片段。将患乳房炎奶牛的eDNA分成2组，分别与不同的接头连接，再与正常奶牛的eDNA进行2次消减杂交和2次抑制性的PCR扩增；将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增，构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关eDNA文库。文库扩增后得到361个白色阳性克隆，随机挑选克隆进行PCR鉴定，插入片段主要分布在200～800